2014年5月7日 星期三

0507馬祖樣本點九宮格

  劃菌培養好後,就是要來挑菌了,挑選的菌落點在 MRS agar,一樣也做三重複,便於後續實驗(雙氧水測試、牛乳培養、MRS 培養)。
  從之前劃菌的三重複中,由外觀、大小、顏色挑選菌落,例如觀測只有兩種,便挑三到四顆菌,並記錄肉眼觀察之描述。





準備動作:
* 開啟無菌操作台 UV 15min
* 牙籤包覆鋁箔後滅菌並烘乾

準備:
1、牙籤
2、MRS agar
3、小燒杯當垃圾桶丟牙籤
4、下方墊編號的紙張,便於點菌
5、多色奇異筆



照這個順序點菌
步驟:
1、挑選菌落並做筆記(用奇異筆在培養基做記號並標號)
2、進無菌操作台。空白的 MRS agar 培養基寫上日期、樣本編號、第幾重複(如 5/7 Tb5 -1)
3、三重複放置於紙張上方,對齊。打開上蓋(小心手部勿經過上方)
4、小心取出牙籤(勿碰到要挑菌那端)挑起菌落,依圖片順序點菌


5、點到三重複的 MRS agar 上(* 挑菌一次,點三次!勿再回去挑,避免挑到別種菌)
6、點好後,牙籤丟棄,換挑下一個菌落。重複點菌即可。
7、全數點完,培養基放置密封塑膠箱,點蠟燭消耗氧氣,培養幾天。






放入箱子中培養

* 有些培養基未長菌,放培養箱 35度C ,再培養幾天。
* 有些培養基目測只有長酵母菌,不用做九宮格。(用一盤培養基滴雙氧水,若產氣(冒泡)就不是乳酸菌。(以下照片皆感覺是酵母菌,今天才知道酵母菌的外觀也這麼多變!而且馬祖樣本的鏡檢也不像之前那批樣本看到的酵母菌是橢圓胖胖的。
目測感覺是酵母菌
滴雙氧水會產氣
和之前看過的酵母菌長不一樣!

* 若培養基內有黴菌,要點菌時,要關閉風扇,不要讓孢子跑進去無菌操作台。

* 插播一則悲劇:上次點菌,發現怎麼培養基很少菌?明明鏡檢的照片中都有細菌啊!後來才發現我們點錯了,拿到顏色較淺的 TSA 培養基......我們是要用 MRS agar 啊!然後我們又發現另一個悲劇,上次配置的 MRS agar 太軟了,非常容易劃破,可能是搖晃不均勻,後來老師帶著我們做一遍,MRS agar 的正確配置法請看另一篇文章「0430實驗筆記:配置 MRS agar 之方法

TSA   v.s.    MRS agar
一劃就破的 MRS agar



* 相關文件:「201404馬祖樣本細菌筆記」(唯共筆夥伴可觀看)



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