接種裝置如照片,將培養基放在中間,吸取 15 μL 的菌液,將 tips 拔起,放在上方黑圈內,再將上方那層往下壓,到碰觸培養基即可。
在無菌台放過夜(23℃),然後在 25℃ 培養。今日測試與 E. coli 的抑制反應。
實驗步驟:
編號:左1、下2、右3、上4 |
水浴槽 |
準備動作:
* 無菌操作台開啟 UV 15min
* 依老師配方配置好 m-MLB,滅菌,用分注器,每盤 25mL
* 滅菌過之 1000μL、200μL需要的 tips
* 配置 TSA 的「soft agar」。即為原 agar 濃度的一半(0.75%),放置螺旋管備用,今天才放入加熱器加熱,並放置水浴槽保溫在 45℃。(水浴槽的水要淹過內容物)
需要物品:
1、震盪器
2、垃圾桶
3、50mL 離心管放小燒杯
4、tips
5、E. coli
◎ 預備動作,先將 E. coli 稀釋:
因原菌液菌數很多,故用離心管先裝 20mL 左右的 TSB,再加入 1mL 的菌液。放小燒杯備用。(使用 TSB 是因為沒有準備好 0.85% 的生理食鹽水,故拿現有的。不然老師說,一般不必使用這麼好的。)
1、從水浴槽拿 3 管 TSA,擦乾外圍水滴後拿入無菌操作台(放 10*5 的試管架,因 5*5 的容易倒掉)
2、吸取菌液 100μL
3、沿著 TSA 的螺旋管管壁注入(避免較低溫的菌液直接接觸 TSA )
4、注入 3 管後,將 tip 吐掉
5、鎖緊後使用震盪器使混勻
6、接著緩慢倒入有接種乳酸菌的 m-MLB 培養基中(螺旋管靠近開口有一凹陷處,使用此地方攔截泡沫,避免倒入培養基中)
7、倒完三盤後,堆至後方,打開上蓋使風乾。等下批倒好即可收。
8、倒完全部後,放入培養箱 35℃ 培養 24hr 後再觀察抑菌圈
* m-MLB(pH 4.96)是經過江老師更改配方,使更適合 E. coli 生長的培養基。(去除原配方的蘋果酸)
* 相關文件:接菌方式請見「20140501 抑菌活性測試」(共筆夥伴才可觀看)
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