2014年4月30日 星期三

0430配置 MRS agar 之方法


今日實驗記錄

「配製」

準備2樣粉末:
*MRS--比例為 55g in 1L
     我們要配置  700 mL*4瓶,故要 55g*0.7*4 = 154g

*Agar--要 1.5%(1L 要有 15g)
     所以每瓶( 0.7L )要加 0.7*15g = 10.5g(要準備10.5g*4)



1、用定量瓶準備好蒸餾水 0.7L*4瓶 = 2800mL(定量瓶要先用蒸餾水沖洗過)。
2、用大塑膠量筒,裝 154g 的 MRS 粉末,先倒一半水量去溶解,放入磁鐵攪拌子置於電磁攪拌器上攪拌均勻。
3、分裝至 容量 1L 的血清瓶,倒 0.7L * 4瓶(因加入粉末,故體積變大,倒完後還有剩)
4、再各加入 10.5g 的Agar
5、鎖緊蓋子、轉鬆半圈、貼滅菌膠帶後放入滅菌釜 121度C,滅菌 15min





攪拌子
加入Agar







倒完後還有剩



「分裝」

準備動作:
*無菌操作台要先開啟 UV 15min
*準備好空白的培養皿(1瓶約可倒 45~60 盤,所以準備 3 條空白培養皿)
*剪刀拿進無菌操作台
*另外準備一個tips的盒子,待會用反面,疊5個培養皿,較好倒。
*也可開啟水浴槽,保溫(水高要超過內容物,設定 50~55度C)

1、用塑膠量筒裝冷水,將 MRS 降溫(水高不要超過內容物,高約到 500mL,以免最上部分先結塊,不然分裝時會倒出塊狀物)
2、不斷換冷水,並搖晃至無「海市蜃樓」的狀況,表示Agar已混勻。(搖晃要小力且大圈,避免快速搖晃產生氣泡。
3、原本是混濁的,降溫至清澈狀態後即可分裝(約為 50~60度C,由冷水拿起的血清瓶,搖晃等待十幾秒,等外部與內部溫度平衡後,手碰觸感覺微燙、但勉強可接受的程度,今天測量為52度C左右)
4、整瓶噴酒精並擦拭,手部也噴酒精,放入無菌台,一次拿 5個空白培養皿,放置tips盒子的反面,先由最下面的開始倒,緩慢倒至整面皆有 MRS 即可。(約 12~13mL)
5、倒好的培養皿推至最底部,便不再動它。
6、倒完後,開 UV 及 power 吹風,吹 1~2 hour。太久,MRS 會縮。
7、MRS 凝結後,將上蓋打開拿至吹風口(可一次10個),並開 UV 1~2 min,至霧氣全乾。吹乾後,將上蓋推進去無菌台,再蓋上。要避免手部經過培養基上方!
8、裝至11號夾鏈袋,並做記號,在培養皿側邊畫上紅線,和m-MLB做區隔。
9、夾鏈袋寫上4/30 MRS後密封即可拿出備用。

清澈時53度C


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